JM108化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86054-01(20×100ul)/BFNC86054-02(100×100ul)

JM108：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

F- endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+)

產(chǎn)品說明

JM108來源于JM106菌株，初是作為黏粒文庫(kù)的宿主被改造而成。 JM108菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。JM108菌株大的特點(diǎn)是擴(kuò)繁質(zhì)粒產(chǎn)量大，純度高，且質(zhì)量穩(wěn)定，特別是超螺旋質(zhì)粒比例較高，超螺旋質(zhì)粒所占比例一般>90%(gyrA96突變型說明JM108菌株的DNA-gyrase 基因被突變，導(dǎo)致拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的功能受影響，增加了超螺旋質(zhì)粒的比例)，非常適合后續(xù)的動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)（超螺旋質(zhì)?？商岣呒?xì)胞轉(zhuǎn)染的效率）。此外該菌株具有萘啶酸抗性。

青旗生物開發(fā)的JM108感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

JM108化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

操作方法

1. JM108感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少13小時(shí)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。