JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86006-01(20×100ul)/BFNC86006-02(100×100ul)

JM109：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (r_k^-,m_k⁺) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI ^qZΔM15]

產(chǎn)品說明

JM109菌株來源于E.coli K strain，是提取高質(zhì)量DNA的理想菌株，recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。攜帶hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內(nèi)源核酸酶系統(tǒng)降解。laqI ^qZΔM15的存在使JM109可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。

青旗生物生產(chǎn)的JM109感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10⁹cfu/μg DNA。

JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

操作方法

1. JM109感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。