人鈣調(diào)素elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人鈣調(diào)素;鈣調(diào)蛋白(CAM)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人鈣調(diào)素;鈣調(diào)蛋白(CAM)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
優(yōu)點:
1、高效、靈敏、特異的抗體;
2、穩(wěn)定的重復性和可靠性;
3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;
5、性價比非常好,節(jié)省實驗經(jīng)費。
人鈣調(diào)素elisa試劑盒的樣品收集、處理及保存方法:
1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離;
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒;
3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物;
4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液;
5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。