酶聯(lián)免疫試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要，細節(jié)不容忽視，它是實驗成功的關鍵與否；在這里我司為方便各位了解，更好的完成實驗，對酶聯(lián)免疫試劑盒的實驗原理和標本處理做出以下分析，供大家參考。
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
適用領域：
1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。
2、研究抗酶抗體的合成。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
酶聯(lián)免疫試劑盒的標本處理：
1、實驗前應預測標本含量，如果標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)；
2、若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預實驗驗證其有效性，并注意留存樣本；
3、使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差；
4、若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況；
5、某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出；
6、建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。
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